本發(fā)明屬于動(dòng)物飼料，具體涉及一種靶向調(diào)控豬腸道羅伊氏乳桿菌的發(fā)酵飼料制備方法及其在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、生豬養(yǎng)殖業(yè)是關(guān)乎國(guó)計(jì)民生的重要產(chǎn)業(yè)，在我國(guó)占有非常重要的地位，豬肉是我國(guó)居民最主要的肉食品。但生豬養(yǎng)殖面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)：非洲豬瘟疫情爆發(fā)以來(lái)，嚴(yán)重影響我國(guó)生豬養(yǎng)殖，在非洲豬瘟等生物安全下如何保障生豬健康尚無(wú)公認(rèn)的最優(yōu)方案；飼料全面禁抗后豬生長(zhǎng)性能和免疫力降低，如何做到生豬綠色健康養(yǎng)殖；環(huán)保和綠色養(yǎng)殖壓力持續(xù)增大，如何改善生豬養(yǎng)分減排等等。
2、現(xiàn)有技術(shù)存在以下問(wèn)題：
3、菌群調(diào)控不精準(zhǔn)：傳統(tǒng)發(fā)酵飼料難以靶向促進(jìn)特定益生菌（如羅伊氏乳桿菌）增殖，導(dǎo)致效果不穩(wěn)定；
4、評(píng)估方法不足：缺乏快速、可靠的體外模型評(píng)估發(fā)酵飼料對(duì)腸道菌群的影響；
5、生產(chǎn)性能提升有限：發(fā)酵工藝未優(yōu)化，抗?fàn)I養(yǎng)因子降解不徹底，飼料利用率低。
6、公開(kāi)專利cn111820329a提出了一種一種乳仔豬發(fā)酵飼料，但其菌種組合未針對(duì)羅伊氏乳桿菌調(diào)控，且未提供體外評(píng)估模型。因此，亟需一種能夠精準(zhǔn)調(diào)控腸道菌群、提升生產(chǎn)性能的發(fā)酵飼料技術(shù)。
7、腸道微生態(tài)與豬的生長(zhǎng)和健康息息相關(guān)，在提高消化吸收，機(jī)體免疫等方面具有重要作用。近年來(lái)一些研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵飼料可以調(diào)節(jié)豬的腸道微生態(tài)，可預(yù)防腸道菌群失調(diào)引發(fā)的疾病，改善豬生產(chǎn)性能。一方面，發(fā)酵飼料可能作為潛在的益生元，促進(jìn)腸道有益菌的生長(zhǎng)；另一方面，發(fā)酵飼料也提供益生菌群，影響了腸道微生物。但是發(fā)酵飼料與豬腸道微生物的因果關(guān)聯(lián)性，以及如何精確調(diào)控等問(wèn)題亟需解決。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的是提供一種發(fā)酵飼料制備方法及其應(yīng)用，通過(guò)特定菌種組合及工藝優(yōu)化，靶向促進(jìn)豬腸道羅伊氏乳桿菌增殖，同時(shí)建立體外評(píng)估模型驗(yàn)證其效果，實(shí)現(xiàn)飼料營(yíng)養(yǎng)與動(dòng)物健康的雙重提升。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
3、1、發(fā)酵飼料制備方法
4、原料配比：玉米、豆粕、黃酒糟按質(zhì)量比4:4:2至4.5:4.5:1混合；優(yōu)選的，原料按質(zhì)量配比為玉米：豆粕：黃酒糟=4:4:2。
5、菌種添加：按發(fā)酵原料總質(zhì)量的0.06%～0.10%添加乳酸片球菌（ pediococcus? acidilactici，保藏號(hào)cgmcc?no:?1.12332），按0.10%～0.12%添加地衣芽孢桿菌（ bacillus? licheniformis，保藏號(hào)cgmcc?no:?1.9048）；按0.1-0.2%添加復(fù)合酶，所述復(fù)合酶包括纖維素酶、半纖維素酶和木聚糖酶，按質(zhì)量比1：1：1混合；優(yōu)選的，復(fù)合酶還可以包括α-淀粉酶，其與所述纖維素酶、半纖維素酶和木聚糖酶，按質(zhì)量比1：1：1：1混合；優(yōu)選的，乳酸片球菌菌粉添加量為0.08%，地衣芽孢桿菌菌粉添加量為0.11%，復(fù)合酶添加量為0.15%。
6、發(fā)酵工藝：調(diào)節(jié)水分至35%～40%，30℃恒溫靜置發(fā)酵3天，至ph降至4.5以下，最終飼料中乳酸片球菌活菌數(shù)達(dá)4.7×108?cfu/g，地衣芽孢桿菌活菌數(shù)達(dá)5.3×108?cfu/g。
7、2、體外評(píng)估方法
8、取發(fā)酵飼料煮沸后與豬糞便樣本按1:1體積比混合；優(yōu)選的，發(fā)酵飼料與糞便的混合比例為2.5?ml發(fā)酵飼料溶液與2.5?ml糞便懸液。
9、接種至無(wú)菌培養(yǎng)基（配方：蛋白胨2g/l、酵母粉2g/l、吐溫80?0.16g/l、nahco32g/l、nacl?0.1g/l、k2hpo40.04g/l、cacl20.01g/l、mgso40.01g/l、血紅素0.02g/l）；
10、37℃厭氧條件下以155?rpm振蕩培養(yǎng)12～14小時(shí)，檢測(cè)乳酸菌豐度及羅伊氏乳桿菌絕對(duì)含量。
11、3、生產(chǎn)應(yīng)用
12、將發(fā)酵飼料按日糧總重的10%等質(zhì)量替代玉米和豆粕，并添加1.0%～2.0%大豆油；
13、顯著提升母豬采食量（6.16?kg/d?vs.?5.76?kg/d）、降低背膘損失（1.28?mm?vs.2.11?mm），提高仔豬斷奶增重（4.33?kg?vs.?3.92?kg），并降低腹瀉率（1.05%?vs.?1.57%）。
14、本發(fā)明的有益效果在于：
15、1、營(yíng)養(yǎng)提升：發(fā)酵后粗蛋白由27.38%增至28.27%，酸溶蛋白由3.57%增至12.52%，抗?fàn)I養(yǎng)因子（如大豆球蛋白）降低85.3%（表1）；
16、2、菌群調(diào)控：發(fā)酵飼料組母豬糞便中羅伊氏乳桿菌絕對(duì)含量提升2.5倍，體外發(fā)酵液中乳酸菌豐度增加40%；
17、3、生產(chǎn)性能優(yōu)化：母豬乳蛋白含量由4.38%提升至4.92%，乳脂含量由6.57%提升至7.31%，仔豬日增重提高3.58%（表3）。
1.一種靶向調(diào)控豬腸道羅伊氏乳桿菌的發(fā)酵飼料制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a中所述原料按質(zhì)量配比為玉米：豆粕：黃酒糟=4:4:2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟b中所述乳酸片球菌菌粉添加量為0.08%，地衣芽孢桿菌菌粉添加量為0.11%，復(fù)合酶添加量為0.15%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟b中所述復(fù)合酶還可以包括α-淀粉酶，其與所述纖維素酶、半纖維素酶和木聚糖酶，按質(zhì)量比1：1：1：1混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c中所述發(fā)酵飼料的ph降至4.5時(shí)終止發(fā)酵，飼料中乳酸片球菌活菌數(shù)達(dá)4.7×108?cfu/g，地衣芽孢桿菌活菌數(shù)達(dá)5.3×108?cfu/g。
6.一種體外厭氧發(fā)酵評(píng)估發(fā)酵飼料對(duì)豬腸道菌群影響的方法，其特征在于，包括以下步驟：i.取權(quán)利要求1制備的發(fā)酵飼料煮沸后與豬糞便樣本混合；ii.接種至無(wú)菌培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基包含蛋白胨2g/l、酵母粉2g/l、吐溫80?0.16g/l、nahco3?2g/l、nacl?0.1g/l、k2hpo4?0.04g/l、cacl2?0.01g/l、mgso4?0.01g/l、血紅素0.02g/l；iii在37℃厭氧條件下以155?rpm振蕩培養(yǎng)12～14小時(shí)；iv檢測(cè)發(fā)酵液中乳酸菌豐度及羅伊氏乳桿菌絕對(duì)含量。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟i中所述發(fā)酵飼料與糞便的混合比例為2.5?ml發(fā)酵飼料溶液與2.5?ml糞便懸液。
8.一種權(quán)利要求1-5任一所述發(fā)酵飼料在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用，其特征在于，將權(quán)利要求1所述發(fā)酵飼料按日糧總重的10%等質(zhì)量替代玉米和豆粕，并添加1.0%～2.0%的大豆油。