本發(fā)明涉及反義寡核苷酸及其治療用途領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、近來，通過使用反義寡核苷酸(aso)調(diào)節(jié)突變基因的剪接，實(shí)現(xiàn)了遺傳紊亂中基因功能的功能恢復(fù)。aso是單鏈、化學(xué)修飾的核酸，其結(jié)合靶基因的前mrna，并以可以恢復(fù)基因功能的方式改變剪接。例如，nusinersen是一種基于aso的藥物，其改變smn2的剪接模式，并成功用于治療脊髓性肌萎縮(sma，parkash?2107；gene?ther)。另一個(gè)實(shí)例是milasen，一種“n＝1”藥物，其中開發(fā)了一種aso以有效地恢復(fù)mfsd8基因中導(dǎo)致巴騰病的特有突變(unique?mutation)的正確剪接(kim等人，2019；n?engl?j?med)。

2、核受體亞家族2組e成員3(nr2e3)基因的缺陷導(dǎo)致一系列遺傳性視網(wǎng)膜紊亂，包括增強(qiáng)s視錐綜合征(escs)、色素性視網(wǎng)膜炎、goldmann-favre綜合征(gfs)和團(tuán)塊狀色素性視網(wǎng)膜變性(clumped?pigmentary?retinal?degeneration)(cprd)(mollema和haider2010；exp?eye?res)。nr2e3是以配體依賴性方式調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的核受體超家族的成員。nr2e3的表達(dá)僅限于人類中視網(wǎng)膜光感受器，并可能以多種能力發(fā)揮功能：1)作為指導(dǎo)有絲分裂后細(xì)胞分化為視桿細(xì)胞的激活劑；2)作為影響視網(wǎng)膜祖細(xì)胞能力和視網(wǎng)膜發(fā)育的阻遏物；和3)成體視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞中光傳導(dǎo)的調(diào)節(jié)因子(mollema和haider?2010；exp?eye?res)。

3、nr2e3中相對(duì)常見的致病突變是c.932g>a(p.arg311gln)(bandah等人，2009；archophthalmol，clinvarid:5532)。這種突變被歸類為錯(cuò)義變體，這意味著它導(dǎo)致第311位的精氨酸殘基變?yōu)楣劝滨０窔埢?。這種變化導(dǎo)致明顯疾病表型的機(jī)制尚不被完全理解(見roduit等人，2009；plos?one，其中證明這種殘基變化不影響同源二聚化、與crx共阻遏物的相互作用和dna結(jié)合)。

4、仍然非常需要適合治療或改善視網(wǎng)膜疾病的化合物，特別是在攜帶c.932g>a突變的受試者中。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種剪接調(diào)節(jié)nr2e3基因的方法，從而消除或減輕致病突變的影響。

2、在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明至少部分基于以下發(fā)現(xiàn)，即c.932g>a突變觸發(fā)nr2e3轉(zhuǎn)錄物的異常剪接，從而導(dǎo)致外顯子6中186個(gè)堿基的框內(nèi)缺失(對(duì)應(yīng)于由nr2e3轉(zhuǎn)錄物編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物中的62個(gè)氨基酸)。因此，發(fā)明人建議使用剪接移位/修飾反義寡核苷酸(aso)，以恢復(fù)nr2e3轉(zhuǎn)錄物的天然和/或適當(dāng)剪接，從而恢復(fù)由此編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的功能。

3、根據(jù)一個(gè)方面，提供了一種治療有需要的受試者中的視網(wǎng)膜疾病的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的至少一種合成反義寡核苷酸(aso)，其中aso誘導(dǎo)包含核受體亞家族2組e成員3(nr2e3)前mrna的第748-933位的核苷酸，從而治療受試者中的視網(wǎng)膜疾病。

4、根據(jù)另一個(gè)方面，提供了一種組合物，其包含aso，該aso包含14至25個(gè)堿基，與nr2e3前mrna具有至少80％的互補(bǔ)性，其特征在于誘導(dǎo)包含nr2e3前mrna的第748-933位的核苷酸。

5、一種用于生產(chǎn)適用于治療視網(wǎng)膜疾病的化合物的方法，該方法包括與nr2e3前mrna的外顯子6結(jié)合的化合物，測(cè)定在化合物存在的情況下包含nr2e3前mrna的第748-933位的核苷酸，并選擇至少一種誘導(dǎo)包含nr2e3前mrna的第748-933位的核苷酸的化合物。

6、在一些實(shí)施方式中，aso包含選自以下的骨架：磷酸核糖骨架、磷酸脫氧核糖骨架、硫代磷酸脫氧核糖骨架、2’-o-甲基硫代磷酸骨架、磷酸二酰胺嗎啉基骨架、肽核酸骨架、2-甲氧基乙基硫代磷酸骨架、交替鎖核酸骨架、硫代磷酸骨架、n3’-p5’磷酸酰胺、2’-脫氧-2’氟代-β-d-阿拉伯核酸、環(huán)己烯核酸骨架核酸、三環(huán)dna(tcdna)核酸骨架及其組合。

7、在一些實(shí)施方式中，aso包含14至25個(gè)堿基。

8、在一些實(shí)施方式中，aso與衍生自以下多核苷酸序列的核酸序列的等長部分具有至少75％的互補(bǔ)性：gtgatcctgctggaagaggcgtggagtgaactctttctcctcggggccatccagtggtctctgcctctggacagctgtcctctgctggcaccgcccgaggcctctgctgccggtggtgcccagggccggctcacgctggccagcatggagacgcgtgtcctgcaggaaactatctctcggttccgggcattggcggtggaccccacggagtttgcctgcatgaaggccttggtcctcttcaagccag(seq?id?no:1)。

9、在一些實(shí)施方式中，aso與gcaggaaactatctctcggttccaggcattggcggtggaccccacggagt(seq?id?no:2)具有至少75％的互補(bǔ)性。

10、在一些實(shí)施方式中，受試者在nr2e3的外顯子6中包含至少一個(gè)框內(nèi)和/或錯(cuò)義突變。

11、在一些實(shí)施方式中，該至少一個(gè)突變?yōu)閏.932g>a。

12、在一些實(shí)施方式中，aso包括化學(xué)修飾的骨架。

13、在一些實(shí)施方式中，化學(xué)修飾的骨架包括：磷酸核糖骨架、磷酸脫氧核糖骨架、硫代磷酸脫氧核糖骨架、2’-o-甲基硫代磷酸骨架、磷酸二酰胺嗎啉基骨架、肽核酸骨架、2-甲氧基乙基硫代磷酸骨架、交替鎖核酸骨架、硫代磷酸骨架、n3’-p5’磷酸酰胺、2’-脫氧-2’-氟代-β-d-阿拉伯核酸、環(huán)己烯核酸骨架核酸、三環(huán)dna(tcdna)核酸骨架及其組合。

14、在一些實(shí)施方式中，組合物進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體。

15、在一些實(shí)施方式中，其用于在有需要的受試者中誘導(dǎo)包含nr2e3前mrna的第748-933位的核苷酸。

16、在一些實(shí)施方式中，受試者在nr2e3前mrna的外顯子6中包含c.932g>a突變。

17、在一些實(shí)施方式中，受試者患有視網(wǎng)膜疾病或患視網(wǎng)膜疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加。

18、在一些實(shí)施方式中，組合物用于治療或預(yù)防有需要的受試者中的視網(wǎng)膜疾病。

19、在一些實(shí)施方式中，nr2e3前mrna在外顯子6中包含c.932g>a突變。

20、除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和/或科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義相同的含義。盡管在本發(fā)明實(shí)施方式的實(shí)踐或測(cè)試中可以使用與本文所述類似或等效的方法和材料，但下面描述了示例性方法和/或材料。如有沖突，以專利說明書(包括定義)為準(zhǔn)。此外，材料、方法和實(shí)例僅是說明性的，并不一定是限制性的。

21、通過下文給出的詳細(xì)描述，本發(fā)明的進(jìn)一步實(shí)施方式和全部適用范圍將變得顯而易見。然而，應(yīng)當(dāng)理解，在指示本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式的同時(shí)，詳細(xì)描述和具體實(shí)例僅通過說明的方式給出，因?yàn)楦鶕?jù)該詳細(xì)描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將清楚本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)的各種變化和修改。