本技術(shù)涉及抑制lect2基因表達(dá)的sirna、sirna綴合物、包含其的藥物組合物、其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

1、白細(xì)胞衍生趨化素2(lect2)是一種16kda的蛋白質(zhì)，主要由肝細(xì)胞產(chǎn)生。它最初在植物血凝素(phytohaemagglutinin，pha)激活的人t細(xì)胞白血病skw-3細(xì)胞中分離出來，被鑒定為一種新的中性粒細(xì)胞趨化因子。近年來，許多研究表明lect2是一種多效性蛋白，它不僅作為一種細(xì)胞因子發(fā)揮趨化特性，還是一種調(diào)節(jié)葡萄糖代謝、肥胖和非酒精性脂肪性肝病的肝因子，在一些生理?xiàng)l件和病理異常中發(fā)揮多功能作用，lect2結(jié)合幾種細(xì)胞表面受體cd209a、tie1和met來調(diào)節(jié)各種細(xì)胞類型中的炎癥反應(yīng)、纖維形成、血管侵襲和腫瘤轉(zhuǎn)移。

2、作為一種細(xì)胞內(nèi)分子，它與lect2介導(dǎo)的淀粉樣變性有關(guān)，其中l(wèi)ect2錯(cuò)誤折疊導(dǎo)致多種組織如腎、肝和肺中的不溶性纖維。此外還發(fā)現(xiàn)lect2與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)展有關(guān)，涉及骨微環(huán)境中破骨細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的失調(diào)。

3、針對(duì)lect2相關(guān)疾病的治療是有限的，并且需要新的治療方法。本發(fā)明旨在提供sirna、sirna綴合物及其藥物組合物，其可影響lect2基因的rna轉(zhuǎn)錄本的rna誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(risc)介導(dǎo)的切割，從而能夠選擇性及有效地抑制lect2基因的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)疾病治療的目的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種抑制lect2基因表達(dá)的sirna，所述sirna包含正義鏈與反義鏈，其中所述sirna中的每個(gè)核苷酸各自獨(dú)立地為修飾或未修飾的核苷酸，其中所述正義鏈含有核苷酸序列i，反義鏈含有核苷酸序列ii，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii至少部分地反向互補(bǔ)形成雙鏈區(qū)，其中所述核苷酸序列i和核苷酸序列ii選自以下序列：

2、(1)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:228所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:229所示的核苷酸序列：

3、5’-gaauauucuuca-3’(seq?id?no:228)

4、5’-ugaagaauauuc-3’(seq?id?no:229)；

5、(2)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:230所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:231所示的核苷酸序列：

6、5’-caacucuaaucagagga-3’(seq?id?no:230)

7、5’-uccucugauuagaguug-3’(seq?id?no:231)；

8、(3)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:232所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:233所示的核苷酸序列：

9、5’-caaugagauccggacgu-3’(seq?id?no:232)

10、5’-acguccggaucucauug-3’(seq?id?no:233)；

11、(4)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:234所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:235所示的核苷酸序列：

12、5’-accgccauggcugugga-3’(seq?id?no:234)

13、5’-uccacagccauggcggu-3’(seq?id?no:235)；

14、(5)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:236所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:237所示的核苷酸序列：

15、5’-caauaauggu-3’(seq?id?no:236)

16、5’-accauuauug-3’(seq?id?no:237)；

17、(6)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:238所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:239所示的核苷酸序列：

18、5’-guguucgaauaucu-3’(seq?id?no:238)

19、5’-agauauucgaacac-3’(seq?id?no:239)；

20、(7)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:240所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:241所示的核苷酸序列：

21、5’-aagagguuuuugug-3’(seq?id?no:240)

22、5’-cacaaaaaccucuu-3’(seq?id?no:241)；

23、(8)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:242所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:243所示的核苷酸序列：

24、5’-uccuauuaagaaggga-3’(seq?id?no:242)

25、5’-ucccuucuuaauagga-3’(seq?id?no:243)；

26、(9)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:244所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:245所示的核苷酸序列：

27、5’-uauugcccuu-3’(seq?id?no:244)

28、5’-aagggcaaua-3’(seq?id?no:245)；

29、(10)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:246所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:247所示的核苷酸序列：

30、5’-guuuauccug-3’(seq?id?no:246)

31、5’-caggauaaac-3’(seq?id?no:247)；

32、(11)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:248所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:249所示的核苷酸序列：

33、5’-cauacaaucgcaugug-3’(seq?id?no:248)

34、5’-cacaugcgauuguaug-3’(seq?id?no:249)；

35、(12)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:250所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:251所示的核苷酸序列：

36、5’-cucgagugacccuacug-3’(seq?id?no:250)

37、5’-caguagggucacucgag-3’(seq?id?no:251)；

38、(13)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:1所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:2所示的核苷酸序列；

39、(14)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:20所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:21所示的核苷酸序列；

40、(15)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:22所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:23所示的核苷酸序列；

41、(16)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:34所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:35所示的核苷酸序列；

42、(17)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:36所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:37所示的核苷酸序列；

43、(18)所述核苷酸序列i包含seq?id?no:224所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq?id?no:225所示的核苷酸序列。

44、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii基本上反向互補(bǔ)、實(shí)質(zhì)上反向互補(bǔ)或完全反向互補(bǔ)；所述基本上反向互補(bǔ)是指兩個(gè)核苷酸序列之間存在不多于3個(gè)的堿基錯(cuò)配；所述實(shí)質(zhì)上反向互補(bǔ)是指兩個(gè)核苷酸序列之間存在不多于1個(gè)的堿基錯(cuò)配；完全反向互補(bǔ)是指兩個(gè)核苷酸序列之間沒有錯(cuò)配。

45、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述正義鏈還含有核苷酸序列iii，所述反義鏈還含有核苷酸序列iv，核苷酸序列iii和核苷酸序列iv的長(zhǎng)度各自獨(dú)立地為0-11個(gè)核苷酸，其中所述核苷酸序列iii連接在核苷酸序列i的5'末端，核苷酸序列iv連接在核苷酸序列ii的3'末端，所述核苷酸序列iii和所述核苷酸序列iv長(zhǎng)度相等并且實(shí)質(zhì)上反向互補(bǔ)或完全反向互補(bǔ)；所述實(shí)質(zhì)上反向互補(bǔ)是指兩個(gè)核苷酸序列之間存在不多于1個(gè)的堿基錯(cuò)配；完全反向互補(bǔ)是指兩個(gè)核苷酸序列之間沒有錯(cuò)配；和/或，所述核苷酸序列iii連接在核苷酸序列i的3'末端，核苷酸序列iv連接在核苷酸序列ii的5'末端，所述核苷酸序列iii和所述核苷酸序列iv長(zhǎng)度相等并且實(shí)質(zhì)上反向互補(bǔ)或完全反向互補(bǔ)；所述實(shí)質(zhì)上反向互補(bǔ)是指兩個(gè)核苷酸序列之間存在不多于1個(gè)的堿基錯(cuò)配；完全反向互補(bǔ)是指兩個(gè)核苷酸序列之間沒有錯(cuò)配。

46、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述sirna包含正義鏈與反義鏈，其中所述sirna中的每個(gè)核苷酸各自獨(dú)立地為修飾或未修飾的核苷酸，其中所述正義鏈含有核苷酸序列i和iii，反義鏈含有核苷酸序列ii和iv，所述核苷酸序列i和iii與所述核苷酸序列ii和iv至少部分地反向互補(bǔ)形成雙鏈區(qū)，其中所述核苷酸序列i和iii、所述核苷酸序列ii和iv選自以下序列：

47、(1)所述核苷酸序列i和iii包含或由如seq?id?no:124所示的核苷酸序列組成，且所述核苷酸序列ii和iv包含或由如seq?id?no:125所示的核苷酸序列組成；

48、(2)所述核苷酸序列i和iii包含或由如seq?id?no:343所示的核苷酸序列組成，且所述核苷酸序列ii和iv包含或由如seq?id?no:371所示的核苷酸序列組成。

49、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述正義鏈還含有核苷酸序列v和/或所述反義鏈還含有核苷酸序列vi，核苷酸序列v和vi的長(zhǎng)度為0至3個(gè)核苷酸，核苷酸序列v連接在所述正義鏈的3'末端構(gòu)成正義鏈的3'突出端，和/或核苷酸序列vi連接在所述反義鏈的3'末端構(gòu)成反義鏈的3'突出端。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述核苷酸序列v或vi的長(zhǎng)度為2個(gè)核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述核苷酸序列v或vi為連續(xù)的兩個(gè)胸腺嘧啶脫氧核糖核苷酸或連續(xù)的兩個(gè)尿嘧啶核糖核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述核苷酸序列v或vi與靶mrna相應(yīng)位置的核苷酸錯(cuò)配或互補(bǔ)。

50、在一個(gè)實(shí)施方案中，該雙鏈區(qū)的長(zhǎng)度是15-30個(gè)核苷酸對(duì)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，雙鏈區(qū)的長(zhǎng)度是17-23個(gè)核苷酸對(duì)。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，雙鏈區(qū)的長(zhǎng)度是19-21個(gè)核苷酸對(duì)。

51、在一個(gè)實(shí)施方案中，正義鏈或反義鏈具有15-30個(gè)核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，正義鏈或反義鏈具有19-25個(gè)核苷酸。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，正義鏈或反義鏈具有19-23個(gè)核苷酸。

52、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述正義鏈或所述反義鏈中的至少一個(gè)核苷酸為修飾的核苷酸，和/或至少一個(gè)磷酸酯基為具有修飾基團(tuán)的磷酸酯基；優(yōu)選地，所述具有修飾基團(tuán)的磷酸酯基為磷酸酯基中的磷酸二酯鍵中的一個(gè)氧原子被硫原子取代而形成的硫代磷酸酯基。

53、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述sirna包括不包含3’突出端核苷酸的正義鏈。

54、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’磷酸基團(tuán)或5’磷酸衍生基團(tuán)，或所述反義鏈的5’末端核苷酸不連接5’磷酸基團(tuán)或5’磷酸衍生基團(tuán)。

55、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述正義鏈的3’末端核苷酸連接反向脫堿基脫氧核糖殘基，和/或，所述正義鏈的5’末端核苷酸連接反向脫堿基脫氧核糖殘基。

56、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述修飾的核苷酸選自2’-氟代修飾的核苷酸，2’-烷氧基修飾的核苷酸，2’-取代的烷氧基修飾的核苷酸，2’-烷基修飾的核苷酸，2’-取代的烷基修飾的核苷酸，2’-氨基修飾的核苷酸，2’-取代的氨基修飾的核苷酸，2’-脫氧核糖核苷酸，核苷酸類似物或其中任意兩種以上的組合。

57、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述修飾的核苷酸選自2’-氟代修飾的核苷酸，2’-甲氧基修飾的核苷酸，2’-o-ch2-ch2-o-ch3修飾的核苷酸，2’-o-ch2-ch＝ch2修飾的核苷酸，2’-ch2-ch2-ch＝ch2修飾的核苷酸，2’-脫氧核糖核苷酸，核苷酸類似物或其中任意兩種以上的組合。

58、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述正義鏈和所述反義鏈中的每一個(gè)核苷酸獨(dú)立地為2’-氟代修飾的核苷酸或非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、8、9、14和16位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、14和16位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第5、7、8和9位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、3、4、5、7、10和14位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第11、12、13和17位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、12和13位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、5、7和14位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第11、12、13和17位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第6、11和13位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、3、5、7、10、12和14位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7和14位，其余位置為非氟代修飾的核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，每一個(gè)非氟代修飾的核苷酸均為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述2’-甲氧基修飾的核苷酸指核糖基的2'-羥基被甲氧基取代而形成的核苷酸。

59、在一個(gè)實(shí)施方案中，每一個(gè)非氟代修飾的核苷酸獨(dú)立地選自核苷酸的核糖基2'位的羥基被非氟基團(tuán)取代形成的核苷酸或核苷酸類似物中的一種，核苷酸類似物選自假尿嘧啶、異核苷酸、lna、ena、cet?bna、una和gna中的一種。

60、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述正義鏈和所述反義鏈中的每一個(gè)核苷酸獨(dú)立地為2’-氟代修飾的核苷酸，2’-甲氧基修飾的核苷酸，gna修飾的核苷酸，2’-脫氧核糖核苷酸或其中任意兩種以上的組合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、8、9、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、14和16位，gna修飾的核苷酸位于反義鏈的第6位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，gna修飾的核苷酸位于反義鏈的第7位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第5、7、8和9位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、3、4、5、7、10和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第11、12、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、3、4、5、7、10和14位，gna修飾的核苷酸位于反義鏈的第6位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、12和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、5、7和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第11、12、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第6、11和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、3、5、7、10、12和14位，gna修飾的核苷酸位于反義鏈的第6位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7和14位，2’-脫氧核糖核苷酸位于反義鏈的第5和12位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸。

61、在一些實(shí)施方案中，所述sirna中以下核苷酸之間的連接中至少一個(gè)為硫代磷酸酯基連接：

62、所述正義鏈的5’末端起始的第1個(gè)核苷酸和第2個(gè)核苷酸之間的連接；

63、所述正義鏈的5’末端起始的第2個(gè)核苷酸和第3個(gè)核苷酸之間的連接；

64、所述正義鏈的3’末端起始的第1個(gè)核苷酸和第2個(gè)核苷酸之間的連接；

65、所述正義鏈的3’末端起始的第2個(gè)核苷酸和第3個(gè)核苷酸之間的連接；

66、所述反義鏈的5’末端起始的第1個(gè)核苷酸和第2個(gè)核苷酸之間的連接；

67、所述反義鏈的5’末端起始的第2個(gè)核苷酸和第3個(gè)核苷酸之間的連接；

68、所述反義鏈的3’末端起始的第1個(gè)核苷酸和第2個(gè)核苷酸之間的連接；

69、所述反義鏈的3’末端起始的第2個(gè)核苷酸和第3個(gè)核苷酸之間的連接。

70、在一些實(shí)施方案中，所述sirna沿5’末端向3’末端方向，

71、(1)所述正義鏈包含位于如下所示位置處的硫代磷酸酯基：

72、所述正義鏈5’末端起始的第1個(gè)核苷酸與第2個(gè)核苷酸之間；和

73、所述正義鏈5’末端起始的第2個(gè)核苷酸與第3個(gè)核苷酸之間；和

74、所述正義鏈3’末端起始的第1個(gè)核苷酸與第2個(gè)核苷酸之間；和

75、所述正義鏈3’末端起始的第2個(gè)核苷酸與第3個(gè)核苷酸之間；

76、或者，

77、(2)所述正義鏈包含位于如下所示位置處的硫代磷酸酯基：

78、所述正義鏈5’末端起始的第1個(gè)核苷酸與第2個(gè)核苷酸之間；和

79、所述正義鏈5’末端起始的第2個(gè)核苷酸與第3個(gè)核苷酸之間；

80、或者，

81、(3)所述正義鏈包含位于如下所示位置處的硫代磷酸酯基：

82、所述正義鏈5’末端起始的第1個(gè)核苷酸與第2個(gè)核苷酸之間；和

83、所述正義鏈5’末端起始的第2個(gè)核苷酸與第3個(gè)核苷酸之間；和

84、所述正義鏈3’末端起始的反向脫堿基脫氧核糖殘基與第1個(gè)核苷酸之間；

85、或者，

86、(4)所述正義鏈包含位于如下所示位置處的硫代磷酸酯基：

87、所述正義鏈5’末端起始的反向脫堿基脫氧核糖殘基和第1個(gè)核苷酸之間；和

88、所述正義鏈5’末端起始的第1個(gè)核苷酸與第2個(gè)核苷酸之間；和

89、所述正義鏈3’末端起始的反向脫堿基脫氧核糖殘基與第1個(gè)核苷酸之間。

90、在一些實(shí)施方案中，所述sirna沿5’末端向3’末端方向，反義鏈包含位于如下所示位置處的硫代磷酸酯基：

91、所述反義鏈5’末端起始的第1個(gè)核苷酸與第2個(gè)核苷酸之間；和

92、所述反義鏈5’末端起始的第2個(gè)核苷酸與第3個(gè)核苷酸之間；和

93、所述反義鏈3’末端起始的第1個(gè)核苷酸與第2個(gè)核苷酸之間；和

94、所述反義鏈3’末端起始的第2個(gè)核苷酸與第3個(gè)核苷酸之間。

95、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述正義鏈和所述反義鏈中的每一個(gè)核苷酸獨(dú)立地為2’-氟代修飾的核苷酸，2’-甲氧基修飾的核苷酸，gna修飾的核苷酸，2’-脫氧核糖核苷酸或其中任意兩種以上的組合。

96、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，3’末端除去突出端；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’磷酸基團(tuán)。

97、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’磷酸基團(tuán)。

98、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、8、9、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’磷酸基團(tuán)。

99、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、14和16位，gna修飾的核苷酸位于反義鏈的第6位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’磷酸基團(tuán)。

100、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，gna修飾的核苷酸位于反義鏈的第7位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’磷酸基團(tuán)。

101、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸不連接5’磷酸基團(tuán)或5’磷酸衍生基團(tuán)。

102、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、8、9、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸不連接5’磷酸基團(tuán)或5’磷酸衍生基團(tuán)。

103、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第7、9、10和11位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，3’末端去除突出端；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

104、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第5、7、8和9位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

105、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、3、4、5、7、10和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

106、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第11、12、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，5’末端的第1個(gè)核苷酸和第2個(gè)核苷酸之間，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

107、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

108、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、3、4、5、7、10和14位，gna修飾的核苷酸位于反義鏈的第6位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

109、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、12和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、6、14和16位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

110、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

111、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、10、11和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、5、7和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

112、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第11、12、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

113、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

114、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第6、11和13位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7、10和14位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

115、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、3、5、7、10、12和14位，gna修飾的核苷酸位于反義鏈的第6位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

116、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照3’到5’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于正義鏈的第9、11、13和17位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修飾的核苷酸位于反義鏈的第2、7和14位，2’-脫氧核糖核苷酸位于反義鏈的第5和12位，其余位置為2’-甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的5’末端核苷酸連接5’-反式乙烯基膦酸酯基團(tuán)。

117、在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了選自表1的sirna；優(yōu)選地，所述sirna選自n-er-fy037090、n-er-fy037023、n-er-fy037090m2、n-er-fy037023m2、n-er-fy037090m3、n-er-fy037090m4、n-er-fy037090m5、n-er-fy037090m6、n-er-fy037023m6、n-er-fy037090m7、n-er-fy037023m8、n-er-fy037023m11、n-er-fy037023m15、n-er-fy037023m27、n-er-fy037023m29、n-er-fy037023m35、n-er-fy037023m37、n-er-fy037023m40、n-er-fy037023m44、n-er-fy037023m45、n-er-fy037023m46、n-er-fy037023m47、n-er-fy037023m48、n-er-fy037023m49、n-er-fy037023m50、n-er-fy037023m51、n-er-fy037088、n-er-fy037088m6、n-er-fy037088m8、n-er-fy037088m15、n-er-fy037088m27、n-er-fy037088m29、n-er-fy037088m35、n-er-fy037088m36、n-er-fy037088m37、n-er-fy037088m40、n-er-fy037088m44、n-er-fy037088m45、n-er-fy037088m46、n-er-fy037088m47、n-er-fy037088m48、n-er-fy037088m49、n-er-fy037088m50、n-er-fy037088m51。

118、本發(fā)明還提供了一種sirna綴合物，所述sirna綴合物含有本發(fā)明的sirna以及綴合至該sirna的綴合基團(tuán)(如下式所示，雙螺旋結(jié)構(gòu)表示所述sirna，并且所述綴合基團(tuán)連接至所述sirna的正義鏈3'末端)：

119、

120、上述綴合物結(jié)構(gòu)中x可選擇為o或s，在一個(gè)實(shí)施方案中，x為o。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述綴合基團(tuán)包含藥學(xué)上可接受的靶向基團(tuán)和接頭，并且所述sirna、所述接頭和所述靶向基團(tuán)依次共價(jià)或非共價(jià)連接。

121、優(yōu)選地，在所述sirna綴合物中，sirna的正義鏈與反義鏈互補(bǔ)形成所述sirna綴合物的雙鏈區(qū)，且所述正義鏈的3’末端形成平末端，所述反義鏈的3’末端具有1-3個(gè)延伸出所述雙鏈區(qū)的突出的核苷酸；

122、或者，

123、在所述sirna綴合物中，sirna的正義鏈與反義鏈互補(bǔ)形成所述sirna綴合物的雙鏈區(qū)，且所述正義鏈的3’末端形成平末端，所述反義鏈的3’末端形成平末端。

124、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述綴合基團(tuán)選自：

125、

126、

127、在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述sirna綴合物為選自表2的sirna綴合物；優(yōu)選地，所述sirna綴合物為n-er-fy037023m2l96、n-er-fy037090m3l96、n-er-fy037090m4l96、n-er-fy037090m5l96、n-er-fy037023m6l96、n-er-fy037023m8l96、n-er-fy037090m7l96、n-er-fy037023m37l96、n-er-fy037023m40l96、n-er-fy037023m44l96、n-er-fy037023m45l96、n-er-fy037023m46l96、n-er-fy037023m47l96、n-er-fy037023m48l96、n-er-fy037023m49l96、n-er-fy037023m50l96、n-er-fy037023m51l96、n-er-fy037088m6l96、n-er-fy037088m37l96、n-er-fy037088m40l96、n-er-fy037088m44l96、n-er-fy037088m45l96、n-er-fy037088m46l96、n-er-fy037088m47l96、n-er-fy037088m48l96、n-er-fy037088m49l96、n-er-fy037088m50l96、n-er-fy037088m51l96。

128、本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的sirna，或本發(fā)明的sirna綴合物，以及藥學(xué)上可接受的載體。

129、本發(fā)明還提供了試劑盒，其包含本發(fā)明的sirna，或本發(fā)明的sirna綴合物，或本發(fā)明的藥物組合物。

130、本發(fā)明還提供了本發(fā)明的sirna，或本發(fā)明的sirna綴合物，或本發(fā)明的藥物組合物用于制備抑制lect2基因表達(dá)的藥劑的用途。

131、本發(fā)明還提供了本發(fā)明的sirna，或本發(fā)明的sirna綴合物，或本發(fā)明的藥物組合物用于制備預(yù)防和/或治療lect2基因過表達(dá)相關(guān)的疾病的藥劑的用途。

132、在具體實(shí)施方案中，所述疾病為肝損傷、肝纖維化、nash、代謝異常、肥胖、胰島素抵抗和全身性淀粉樣變性。

133、本發(fā)明還提供了抑制lect2基因表達(dá)的方法，包括將治療有效量的本發(fā)明的sirna，或本發(fā)明的sirna綴合物，或本發(fā)明的藥物組合物與表達(dá)lect2的細(xì)胞接觸或給予有需要的受試者。

134、本發(fā)明還提供了治療和/或預(yù)防lect2基因過表達(dá)相關(guān)的疾病的方法，包括將治療有效量的本發(fā)明的sirna，或本發(fā)明的sirna綴合物，或本發(fā)明的藥物組合物給予有需要的受試者。

135、在具體實(shí)施方案中，所述疾病為肝損傷、肝纖維化、nash、代謝異常、肥胖、胰島素抵抗和全身性淀粉樣變性。

136、有益效果

137、本技術(shù)提供的sirna、藥物組合物和sirna綴合物在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中顯示出優(yōu)異的lect2基因表達(dá)抑制活性，具有良好的治療lect2基因過表達(dá)相關(guān)的疾病的潛力。例如，本技術(shù)公開的sirna及其綴合物能夠降低肝臟中l(wèi)ect2?mrna的表達(dá)，毒副作用低，血漿穩(wěn)定性好，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

138、本技術(shù)提供的sirna在phh細(xì)胞中顯示出對(duì)lect2基因良好的抑制效果。

139、在一些具體實(shí)施方式中，本發(fā)明的sirna在5nm和0.5nm下均可顯著抑制lect2基因的表達(dá)，其中sirna優(yōu)選地，在5nm下48h抑制率基本為90％以上，在0.5nm下48h抑制率基本為88％以上。

140、在一些具體實(shí)施方式中，本技術(shù)提供的sirna在phh細(xì)胞中有較高的lect2基因抑制活性，ic50可低至0.0015nm。

141、在一些具體實(shí)施方式中，本技術(shù)提供的sirna綴合物在phh細(xì)胞中具有較高的lect2基因抑制活性，在sirna綴合物通過自由攝取進(jìn)入phh的情況下，在200nm下48h抑制率基本為95％以上，在10nm下48h抑制率基本為88％以上；在sirna綴合物通過轉(zhuǎn)染進(jìn)入phh的情況下，在5nm下48h抑制率基本為90％以上，在0.5nm下48h抑制率基本為86％以上。