發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及與人白細(xì)胞介素樣轉(zhuǎn)錄物4(ilt4)結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段的藥物制劑及其在治療各種病癥(例如癌癥)中的用途。
背景技術(shù):
0、發(fā)明背景
1、腫瘤細(xì)胞用來逃避先天和獲得性免疫應(yīng)答的常見策略與人白細(xì)胞抗原(hla)-g的異常表達(dá)相關(guān)(curigliano等人clin?cancer?res.2013;19(20):5564-5571和gonzalez等人crit?rev?clin?lab?sci.2012;49(3):63-84)。hla-g可以通過受體結(jié)合和/或通過胞啃作用(trogocytosis)和趨化性的削弱而直接抑制免疫細(xì)胞功能(morandi等人cytokinegrowth?factor?review.2014,25:327-335和lin等人mol?med.2015,21:782-791)。hla-g在多重腫瘤類型(包括例如結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和胃癌)中的高表達(dá)與晚期疾病分期、腫瘤侵襲性、轉(zhuǎn)移潛能和不良預(yù)后相關(guān)(lin等人mol?med.2015,21:782-791和loumange等人intj?cancer.2014,135,222:581-597)。轉(zhuǎn)基因小鼠模型中抗體介導(dǎo)的hla-g功能的阻斷已顯示抑制腫瘤進(jìn)展并阻斷髓源性抑制細(xì)胞(mdsc)的擴(kuò)增(loumange等人int?j?cancer.2014,135,222:581-597,lin等人hum?immunol.2013,74:439-446,和agaugue等人blood.2011,117:7021-7031)。hla-g與ilt4的結(jié)合可以直接抑制單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的功能,因此削弱先天免疫抗腫瘤應(yīng)答。hla-g與單核細(xì)胞之間由于ilt4的相互作用抑制了人單核細(xì)胞衍生的抗原呈遞細(xì)胞(apc)的成熟,導(dǎo)致通過stat3激活的mhc?ii類抗原和共刺激分子的表達(dá)減少(colonna等人j?immunol.1998,160:3096-3100;allan等人j?exp?med.1999,189(7):1149-1155,和liang等人procnatlsci?usa.2008,105(24):8357)。使用人單核細(xì)胞衍生的樹突狀細(xì)胞(dc)和ilt4轉(zhuǎn)基因小鼠,hla-g顯示誘導(dǎo)耐受原性apc的發(fā)育,伴隨髓系dc的成熟/激活停滯,并且耐受原性dc通過hla-g的誘導(dǎo)是通過破壞mhc?ii類呈遞途徑(ristich等人eur?j?immunol.2005,35:1133-1142)。
2、對于患有癌癥的患者存在尚未滿足的醫(yī)療需求,所述癌癥并不響應(yīng)t細(xì)胞療法,但可能受益于組織相關(guān)巨噬細(xì)胞/mdsc介導(dǎo)的腫瘤耐受性的緩解(例如,“富含”髓系的腫瘤)。ilt4阻斷將滿足這一需求,并且通過緩解腫瘤微環(huán)境中的耐受原性髓系細(xì)胞的抑制,與當(dāng)前的t細(xì)胞靶向抗體(例如抗pd1、抗tigit)區(qū)分開。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、在一個方面,本文提供了關(guān)于抗人ilt4(抗ilt4)抗體或其抗原結(jié)合片段的制劑,其包含:(i)約10mg/ml至約200mg/ml的抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段;(ii)約5mm至約20mm的緩沖液;(iii)約6%至約8%重量/體積(w/v)的非還原糖;(iv)約0.01%至約0.10%(w/v)的非離子型表面活性劑;和(v)約1mm至約20mm的抗氧化劑,其中所述抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含以下的重鏈可變結(jié)構(gòu)域:cdr-h1:gyyws(seq?id?no:16),cdr-h2:einhxgstnynpslks,其中x為s或a(seq?id?no:17),和cdr-h3:lptrwvttryfdl(seq?id?no:18);以及包含以下的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域:cdr-l1:tgsssnigagydvh(seq?id?no:19),cdr-l2:gx1x2nrps,其中x1為n、q、e或d,且x2為s或a(seq?id?no:20),和cdr-l3:qsfdnslsayv(seqid?no:21),其中所述緩沖液是l-組氨酸緩沖液、乙酸鹽緩沖液或檸檬酸鹽緩沖液,其中所述非還原糖是二糖,其中所述非離子型表面活性劑是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80,并且其中所述抗氧化劑是甲硫氨酸。
2、在某些實施方案中,緩沖液選自l-組氨酸緩沖液、乙酸鹽緩沖液和檸檬酸鹽緩沖液。在一個實施方案中,緩沖液是l-組氨酸緩沖液。在另一個實施方案中,緩沖液是乙酸鹽緩沖液。在又一個實施方案中,緩沖液是檸檬酸鹽緩沖液。
3、在一些實施方案中,非還原糖是蔗糖。
4、在某些實施方案中,非離子型表面活性劑是聚山梨醇酯80(ps-80)或聚山梨醇酯20(ps-20)。在一個實施方案中,非離子型表面活性劑是ps-80。在另一個實施方案中,非離子型表面活性劑是ps-20。
5、在一些實施方案中,抗氧化劑是l-甲硫氨酸。
6、因此,在另一個方面,本文提供了關(guān)于抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的制劑,其包含:(i)約10mg/ml至約200mg/ml的抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段;(ii)約5mm至約20mm?l-組氨酸緩沖液;(iii)約6%至約8%(w/v)蔗糖;(iv)約0.01%至約0.10%(w/v)ps-80;和(v)約1mm至約20mm?l-甲硫氨酸,其中所述抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含以下的重鏈可變結(jié)構(gòu)域:cdr-h1:gyyws(seq?id?no:16),cdr-h2:einhxgstnynpslks,其中x為s或a(seq?id?no:17),和cdr-h3:lptrwvttryfdl(seq?id?no:18);以及包含以下的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域:cdr-l1:tgsssnigagydvh(seq?id?no:19),cdr-l2:gx1x2nrps,其中x1為n、q、e或d,且x2為s或a(seq?id?no:20),和cdr-l3:qsfdnslsayv(seq?id?no:21)。
7、在一些實施方案中,制劑包含約8mm至約12mm?l-組氨酸緩沖液。
8、在某些實施方案中,制劑包含約5mm至約10mm?l-甲硫氨酸。
9、在其它實施方案中,制劑包含約0.01%至約0.05%(w/v)ps-80。
10、在又其它實施方案中,制劑包含約10mg/ml至約150mg/ml的抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段。在另外其它實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的濃度為約10mg/ml、約12.5mg/ml、約15mg/ml、約25mg/ml、約50mg/ml、約75mg/ml、約100mg/ml、約125mg/ml或約150mg/ml。在一個實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的濃度為約10mg/ml。在另一個實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的濃度為約12.5mg/ml。在又一個實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的濃度為約15mg/ml。在另外一個實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的濃度為約25mg/ml。在一個實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的濃度為約50mg/ml。在另一個實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的濃度為約75mg/ml。在又一個實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的濃度為約100mg/ml。在另外一個實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的濃度為約125mg/ml。在又另外一個實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的濃度為約150mg/ml。在具體實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆抗體。
11、因此,在一個具體實施方案中,制劑包含約25mg/ml的抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段、約10mm?l-組氨酸緩沖液、約7%w/v蔗糖、約0.025%聚山梨醇酯80和約10mm?l-甲硫氨酸。
12、在另一個具體實施方案中,制劑包含約50mg/ml的抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段、約10mm?l-組氨酸緩沖液、約7%w/v蔗糖、約0.025%聚山梨醇酯80和約10mm?l-甲硫氨酸。
13、在又一個具體實施方案中,制劑包含約75mg/ml的抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段、約10mm?l-組氨酸緩沖液、約7%w/v蔗糖、約0.025%聚山梨醇酯80和約10mm?l-甲硫氨酸。
14、在另外一個具體實施方案中,制劑包含約100mg/ml的抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段、約10mm?l-組氨酸緩沖液、約7%w/v蔗糖、約0.025%聚山梨醇酯80和約10mm?l-甲硫氨酸。
15、在又另外一個具體實施方案中,制劑包含約125mg/ml的抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段、約10mm?l-組氨酸緩沖液、約7%w/v蔗糖、約0.025%聚山梨醇酯80和約10mm?l-甲硫氨酸。
16、在本文提供的各種制劑的某些實施方案中,制劑具有約5.0至約6.8的ph范圍。在一些實施方案中,制劑具有約5.5至約6.0的ph范圍。在其它實施方案中,制劑具有約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9或約6.0的ph。在一個實施方案中,制劑具有約5.5的ph。在另一個實施方案中,制劑具有約5.6的ph。在又一個實施方案中,制劑具有約5.7的ph。在另外一個實施方案中,制劑具有約5.8的ph。在另一個實施方案中,制劑具有約5.9的ph。在又另外一個實施方案中,制劑具有約6.0的ph。
17、因此,在一個具體實施方案中,關(guān)于抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的藥物制劑包含:(i)約50mg/ml至約100mg/ml的抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段;(ii)約10mm?l-組氨酸緩沖液,ph約5.5;(iii)約7%(w/v)蔗糖;(iv)約0.025%(w/v)聚山梨醇酯80;和(v)約10mml-甲硫氨酸,其中所述抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含以下的重鏈可變結(jié)構(gòu)域:cdr-h1:gyyws(seq?id?no:16),cdr-h2:einhxgstnynpslks,其中x為s或a(seq?id?no:17),和cdr-h3:lptrwvttryfdl(seq?id?no:18);以及包含以下的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域:cdr-l1:tgsssnigagydvh(seq?id?no:19),cdr-l2:gx1x2nrps,其中x1為n、q、e或d,且x2為s或a(seqid?no:20),和cdr-l3:qsfdnslsayv(seq?id?no:21)。
18、在本文提供的各種制劑的某些實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含以下的重鏈可變結(jié)構(gòu)域:cdr-h1:gyyws(seq?id?no:16),cdr-h2:einhxgstnynpslks,其中x為s或a(seq?id?no:17),和cdr-h3:lptrwvttryfdl(seq?id?no:18);以及包含以下的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域:cdr-l1:tgsssnigagydvh(seq?id?no:19),cdr-l2:gx1x2nrps,其中x1為n、q、e或d,且x2為s或a(seq?id?no:20),和cdr-l3:qsfdnslsayv(seq?id?no:21)。
19、在本文提供的各種制劑的一些實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含以下的重鏈可變結(jié)構(gòu)域:cdr-h1:gyyws(seq?id?no:16),cdr-h2:einhagstnynpslks(seqid?no:48),和cdr-h3:lptrwvttryfdl(seq?id?no:18);以及包含以下的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域:cdr-l1:tgsssnigagydvh(seq?id?no:19),cdr-l2:gdsnrps(seq?id?no:52),和cdr-l3:qsfdnslsayv(seq?id?no:21)。
20、在本文提供的各種制劑的其它實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含seq?id?no:57中所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和包含seq?id?no:58中所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
21、在本文提供的各種制劑的又其它實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含seq?id?no:2中所示的氨基酸序列的重鏈和包含seq?id?no:7中所示的氨基酸序列的輕鏈。
22、在本文提供的各種制劑的另外其它實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含seq?id?no:80中所示的氨基酸序列的重鏈和包含seq?id?no:7中所示的氨基酸序列的輕鏈。
23、在本文提供的各種制劑的某些實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包含:由seq?id?no:57中所示的氨基酸序列組成的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和由seq?id?no:58中所示的氨基酸序列組成的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
24、在本文提供的各種制劑的一些實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包含:由seq?id?no:2中所示的氨基酸序列組成的重鏈和由seq?id?no:7中所示的氨基酸序列組成的輕鏈。
25、在本文提供的各種制劑的某些實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆抗體,其包含:包含seq?id?no:2中所示的氨基酸序列的兩條重鏈和包含seq?id?no:7中所示的氨基酸序列的兩條輕鏈。
26、在本文提供的各種制劑的某些實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆抗體,其包含:由seq?id?no:2中所示的氨基酸序列組成的兩條重鏈和由seq?id?no:7中所示的氨基酸序列組成的兩條輕鏈。
27、在本文提供的各種制劑的其它實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段包含:由seq?id?no:80中所示的氨基酸序列組成的重鏈和由seq?id?no:7中所示的氨基酸序列組成的輕鏈。
28、在本文提供的各種制劑的某些實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆抗體,其包含:包含seq?id?no:80中所示的氨基酸序列的兩條重鏈和包含seq?id?no:7中所示的氨基酸序列的兩條輕鏈。
29、在本文提供的各種制劑的某些實施方案中,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆抗體,其包含:由seq?id?no:80中所示的氨基酸序列組成的兩條重鏈和由seq?id?no:7中所示的氨基酸序列組成的兩條輕鏈。
30、在一個實施方案中,制劑是液體制劑。在一個實施方案中,制劑是冷凍制劑。在另一個實施方案中,液體制劑在約5℃下貯存。在又一個實施方案中,制劑在約-20℃或更低冷凍貯存。在又一個實施方案中,制劑在約-70℃或更低冷凍貯存。在另外一個實施方案中,液體制劑是來自凍干制劑的重構(gòu)溶液。
31、在某些實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃(例如,3℃、4℃、5℃)下長達(dá)6個月后,(i)如通過超高效尺寸排阻層析確定的,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的%單體為至少約99%;(ii)如通過od350-500測量的,制劑的濁度為至多約0.135;(iii)如通過高效離子交換層析確定的,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的%主峰為至少約63%,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的%酸性變體為至多約23%,和/或抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的堿性變體為至多約14%;(iv)如通過微流成像確定的,大小為至少2μm的顆粒的亞可見顆粒計數(shù)為至多約3500;和/或(v)如通過還原肽圖分析確定的,如seq?id?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中選自w7、w102、m253、m359和m429的一個或多個氨基酸殘基的%氧化小于約4%。
32、在一些實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過超高效尺寸排阻層析確定的,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的%單體為至少約99%。
33、在一些實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過od350-500測量的,制劑的濁度為至多約0.135。
34、在一些實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過高效離子交換層析確定的,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的%主峰為至少約63%。在一些實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過高效離子交換層析確定的,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的%酸性變體為至多約23%。在一些實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過高效離子交換層析確定的,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的堿性變體為至多約14%。在一些實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過高效離子交換層析確定的,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的%主峰為至少約63%,抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的%酸性變體為至多約23%,并且抗ilt4抗體或其抗原結(jié)合片段的堿性變體為至多約14%。
35、在一些實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過微流成像確定的,大小為至少2μm的顆粒的亞可見顆粒計數(shù)為至多約3500。
36、在一些實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過還原肽圖分析確定的,如seq?id?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中選自w7、w102、m253、m359和m429的一個或多個氨基酸殘基的%氧化小于約4%。在一個實施方案中,氨基酸殘基是如seq?idno:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中的w7。在另一個實施方案中,氨基酸殘基是如seqid?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中的w102。在又一個實施方案中,氨基酸殘基是如seq?id?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中的m253。在另外一個實施方案中,氨基酸殘基是如seq?id?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中的m359。在又另外一個實施方案中,氨基酸殘基是如seq?id?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中的m429。
37、在一個實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過還原肽圖分析確定的,如seq?id?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中選自w7、w102、m253、m359和m429的一個氨基酸殘基的%氧化小于約4%。在一個實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過還原肽圖分析確定的,如seq?id?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中選自w7、w102、m253、m359和m429的兩個氨基酸殘基的%氧化小于約4%。在一個實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過還原肽圖分析確定的,如seq?id?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中選自w7、w102、m253、m359和m429的三個氨基酸殘基的%氧化小于約4%。在一個實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過還原肽圖分析確定的,如seq?id?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中選自w7、w102、m253、m359和m429的四個氨基酸殘基的%氧化小于約4%。在一個實施方案中,在制劑貯存于約3℃至約5℃下6個月后,如通過還原肽圖分析確定的,如seq?id?no:2或80中所示的抗ilt4抗體的重鏈中來自w7、w102、m253、m359和m429的所有五個氨基酸殘基的%氧化小于約4%。
38、在又一個方面,本文提供了治療有此需要的人患者中的癌癥的方法,其包括施用治療有效量的本文所述的藥物制劑。
39、在另外一個方面,本文提供了本文所述的藥物制劑用于制備用于治療癌癥的藥劑的用途。