本發(fā)明屬于生物，具體是涉及色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1在防治水稻紋枯病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、水稻紋枯病是由立枯絲核菌(rhizoctonia?solani)引起的一種土傳性真菌病害，也是一種危害遍布全球的水稻病害，水稻紋枯病危害大、流行性強(qiáng)、防治困難，嚴(yán)重影響水稻的生長(zhǎng)、產(chǎn)量和品質(zhì)。當(dāng)前，化學(xué)農(nóng)藥被廣泛應(yīng)用于防治紋枯病，但長(zhǎng)期使用導(dǎo)致環(huán)境污染、病原菌抗藥性增加以及農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)殘超標(biāo)等問(wèn)題。因此，開(kāi)發(fā)綠色、環(huán)保且高效的生物防治方法顯得尤為重要。生物防治具有安全性高，對(duì)環(huán)境影響小等優(yōu)點(diǎn)。
2、植物內(nèi)生細(xì)菌具有促進(jìn)植物生長(zhǎng)，提高寄主植物的抗病性，增強(qiáng)植物對(duì)環(huán)境的抗逆性等特性，是一種豐富而寶貴的自然資源，具有被人類開(kāi)發(fā)利用的潛力。浮萍(lemnaspp.)作為一種廣泛分布的水生植物，與多種內(nèi)生菌共生，這些內(nèi)生菌可以分泌多種生物活性物質(zhì)，包括抗生素、酶類、鐵載體和揮發(fā)性有機(jī)物(vocs)，具有潛在的病原菌抑制和植物促生長(zhǎng)功能。然而，目前關(guān)于浮萍內(nèi)生菌在病害防治中的研究鮮有報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、基于以上問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于通過(guò)從浮萍中分離高效拮抗菌株，并用形態(tài)學(xué)、生理生化特征、16s?rdna序列對(duì)菌株進(jìn)行鑒定，以期為水稻紋枯病的生物防治提供優(yōu)質(zhì)的內(nèi)生菌，同時(shí)為水稻紋枯病提供一種綠色解決方案。
2、實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下：
3、本發(fā)明的第一方面，提供色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1在抗立枯絲核菌中的應(yīng)用。
4、本發(fā)明的第二方面，提供色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1在預(yù)防和/或治療立枯絲核菌導(dǎo)致的水稻紋枯病中的應(yīng)用。
5、在其中的一些實(shí)施例中，前述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的16srrna如seq?id?no:1所示，或者與seq?id?no:1有95％以上的同源性，或與genbank:op364816.1屬于同一株菌。
6、在其中的一些實(shí)施例中，前述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1是從浮萍中篩選的。
7、本發(fā)明的第三方面，還提供一種預(yù)防和/或治療立枯絲核菌導(dǎo)致的水稻紋枯病的方法，用含有所述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的溶液對(duì)水稻灌根或者噴施于水稻各個(gè)生長(zhǎng)期，如幼苗期、分蘗期、拔節(jié)期、孕穗期、抽穗期、開(kāi)花期等，優(yōu)選所述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的16s?rrna如seq?id?no:1所示，或者與seq?id?no:1有95％以上的同源性，或與genbank:op364816.1屬于同一株菌。
8、在其中的一些實(shí)施例中，前述噴施是將含有所述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的溶液噴施于水稻生長(zhǎng)期的分蘗期、抽穗期和齊穗期。尤其是分蘗期是水稻紋枯病高發(fā)期，更需要防范。
9、在其中的一些實(shí)施例中，上述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的濃度為7×10^8cfu/ml～9×10^8cfu/ml(8×10^8cfu/ml時(shí)，od600＝1)。
10、本發(fā)明的第四方面，是提供前述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的篩選方法包括以下步驟：
11、(1)收集浮萍，沖洗，再用滅菌水沖洗；
12、(2)用滅菌濾紙吸干水分，分別用酒精和次氯酸鈉溶液浸泡，再用滅菌水潤(rùn)洗，將浮萍用滅菌濾紙吸干，得浮萍樣品；
13、(3)用經(jīng)滅菌處理后的研缽研磨浮萍樣品，用pbs緩沖液將研磨液進(jìn)行10x倍梯度稀釋，取各濃度稀釋液涂布于lb培養(yǎng)基，于25-35℃培養(yǎng)2～3d后進(jìn)一步劃線純化、分離純化，得浮萍內(nèi)生菌；
14、(4)對(duì)浮萍內(nèi)生菌進(jìn)行16s?rrna分子生物學(xué)鑒定，獲得色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1，所述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的16srrna如seq?id?no:1所示，或者與seq?id?no:1有95％以上的同源性，或與genbank:op364816.1屬于同一株菌。
15、在其中的一些實(shí)施例中，在步驟(3)與步驟(4)之間還包括：取最后一次沖洗過(guò)的無(wú)菌水涂布于lb培養(yǎng)基上作為對(duì)照，以證明所分離出的細(xì)菌是浮萍內(nèi)生菌。
16、本發(fā)明首次從浮萍中分離出對(duì)水稻紋枯病病原菌--立枯絲核菌具有顯著拮抗作用的色桿菌屬菌株lemna-chromobacterium-x1，并用形態(tài)學(xué)、生理生化特征、16s?rdna序列對(duì)菌株進(jìn)行鑒定，為水稻紋枯病的生物防治提供了一種優(yōu)質(zhì)的內(nèi)生菌，同時(shí)為水稻紋枯病的綠色防控提供了一種綠色解決方案，具有廣泛的農(nóng)業(yè)推廣應(yīng)用前景。
1.色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1在抗立枯絲核菌中的應(yīng)用。
2.色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1在預(yù)防和/或治療立枯絲核菌導(dǎo)致的水稻紋枯病中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的16s?rrna如seq?id?no:1所示，或者與seq?id?no:1有95％以上的同源性，或與genbank:op364816.1屬于同一株菌。
4.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1是從浮萍中篩選的。
5.一種預(yù)防和/或治療立枯絲核菌導(dǎo)致的水稻紋枯病的方法，其特征是，用含有所述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的溶液對(duì)水稻灌根或者噴施于水稻各個(gè)生長(zhǎng)期，優(yōu)選所述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的16s?rrna如seq?id?no:1所示，或者與seq?idno:1有95％以上的同源性，或與genbank:op364816.1屬于同一株菌。
6.如權(quán)利要求5所述預(yù)防和/或治療立枯絲核菌導(dǎo)致的水稻紋枯病的方法，其特征是，將含有所述色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的溶液噴施于水稻生長(zhǎng)期的分蘗期，抽穗期，和齊穗期。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征是，所述溶液中，色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的濃度為7×10^8cfu/ml～9×10^8cfu/ml。
8.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征是，所述溶液中，色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的濃度為7.5×10^8cfu/ml～8.5×10^8cfu/ml。
9.一種色桿菌屬lemna-chromobacterium-x1的篩選方法，其特征是，包括以下步驟：
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的篩選方法，其特征是，在步驟(3)與步驟(4)之間還包括：取最后一次沖洗過(guò)的無(wú)菌水涂布于lb培養(yǎng)基上作為對(duì)照，以證明所分離出的細(xì)菌是浮萍內(nèi)生菌。